流式细胞术是一种先进技术，利用流式细胞仪对快速直线流动的单列细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定性、定量分析或分选。其特点包括检测速度快、测量指标丰富、数据采集量大、分析全面、分选纯度高、方法灵活等。尊龙凯时在此分享流式实验中常见的三大问题及其解决方案，帮助大家有效避免实验误区。

一、检测结果无信号或信号弱

可能原因及解决方案：

• 抗体贮存不当：抗体应保存在2-8℃，避光保存，避免反复冻融。
• 抗体过期使用：确保使用在保质期内的抗体。
• 过度固定：尽量选择新鲜样本，预实验可帮助确定适合的固定剂及条件。
• 荧光染料淬灭：抗体染色后应避光保存，尽快上机检测。
• 自发荧光较高：使用空白对照确认自发荧光水平，选用适合的染色时间和温度。
• 抗体浓度过低：需滴定抗体以确定最佳浓度。
• 细胞数量过多：适当调整细胞密度，通常应低于1×10⁷个/ml。
• 荧光素不稳定：根据荧光素属性选择合适的保存和孵育条件。
• 靶抗原含量低/不存在：确认靶蛋白在样本中正常表达，必要时进行细胞富集。
• 补偿调节过度：选择发射光谱不重叠的染料，检查补偿设置。
• 细胞群设门不正确：确保准确设门，使用死活染料可减少假阳性。

二、荧光强度过高

可能原因及解决方案：

• 染色时间太长：根据实验情况适当调整抗体染色条件。
• 抗体浓度过高：需滴定抗体以确定最佳浓度。
• 补偿不当：选择发射光谱不重叠的染料，确保补偿设置正确。
• 洗涤不充分：优化洗涤步骤，增加洗涤次数。
• 高表达抗原搭配荧光亮度高的染料：基于“强表达抗原搭配弱荧光染料”的原则选择合适的流式抗体。
• 仪器参数设置不合理：检查激光强度和增益设置，避免过度饱和。

三、背景高

可能原因及解决方案：

• 死细胞、粘连体非特异性结合：使用新鲜样本，排除死细胞。
• 染色时间太长：根据实验情况适当调整抗体染色条件。
• 洗涤不充分：优化洗涤步骤，适当增加洗涤次数。
• 过度固定：尽量选择新鲜样本，预实验可确定合适的固定条件。
• 自发荧光：使用空白对照确认自发荧光水平。
• 封闭不充分：适当增加封闭剂的浓度或孵育时间。
• 细胞群设门不正确：确保设门准确，使用死活染料可显著降低假阳性。
• 补偿不当：确保每种荧光染料的信号正确补偿。

在实际操作中，实验结果可能受多种因素的影响，如抗体选择、样本制备、实验操作及仪器设置等。尊龙凯时希望以上关于无信号或信号弱、荧光强度过高和背景高的常见问题及解决方案，能帮助大家获得理想的实验结果。如需更多流式实验的干货，欢迎持续关注尊龙凯时！